申請日2014.10.17
公開(公告)日2015.02.18
IPC分類號C12N1/04
摘要
本發明公開了一種污水處理用液態菌劑的保存方法。該保存方法主要有以下步驟：1)采用緩沖液調節液態菌劑的pH值至6-6.5;2)用氮氣排除液態菌劑中的溶解氧;3)投加脫氧劑和菌抑制劑;4)以液體石蠟封面，并密封保存。采用本發明所述保存方法保存12個月后活菌量和降解活性分別可達到65%和75%以上。
權利要求書
1.一種污水處理用液態菌劑的保存方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)采用緩沖液調節液態菌劑的pH至6-6.5;
2)用氮氣排除液態菌劑中的溶解氧;
3)投加脫氧劑和菌抑制劑;
4)以液體石蠟封面，并于室溫條件下密封保存;
所述的緩沖液為濃度為0.05-0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液或檸檬酸鹽緩沖液;
所述脫氧劑為抗壞血酸，所述菌抑制劑為山梨酸鉀，其中每千毫升液態菌劑中抗 壞血酸的投加量為0.5g-1g，山梨酸鉀投加量為2g-4g。
2.根據權利要求1所述的保存方法，其特征在于，用氮氣排除液態菌劑中溶解氧采 用曝氮氣的方法實現，曝氣時間為10-30min。
3.根據權利要求1所述的保存方法，其特征在于，所述的液態菌劑選自降油菌、苯 酚降解菌、硝化菌和COD降解菌。
說明書
一種污水處理用液態菌劑的保存方法
技術領域
本發明屬于微生物水處理領域，具體涉及到污水處理領域所用功能菌種的保存 方法。
背景技術
當前，我國環境污染仍然十分嚴峻，各種污染治理工藝與方法紛紛涌現，其中生 物處理法是主流技術手段，近年來以環境保護和污染防治為目的而研發的微生物菌劑 日趨增多，微生物菌劑的使用不僅可以大大縮短處理系統的啟動時間與提高處理效 率，同時對難降解有毒污染物具有良好的降解效果，并可以提高處理系統的抗沖擊性 能。
但由于環境微生物菌劑是活菌制劑，因此其死亡快，不易保存;而污染凈化效果 直接與菌劑中的有效活菌數及其活性密切相關。因此，如何保證菌劑保存過程中的活 性和有效活菌數是菌劑應用于污染治理的一項技術難題。
目前關于液態菌劑保存的研究仍以低溫、冷凍干燥等傳統保存技術為主，這些傳 統保存技術在工業化上無法實現對發酵菌劑的大規模保存。而現階段關于液態菌劑保 存技術的研究較少且效果較差，有研究對處理煉油廢水的微生物菌劑進行常溫保存3 個月后其存活率只有60%左右，因此開發保存效率更高的液態菌劑室溫保存技術定將 成為今后研究的重點。
發明內容
針對現有的傳統微生物保存技術無法對菌劑實現規�；４娴谋锥�，同時現階 段關于液態菌劑室溫保存技術的研究較少，本發明提供一種操作方便、保存量大、保 存后菌活性高、成本低廉的液態菌劑保存方法，從而為液態菌劑的商品化與工業化應 用提供必要的技術支持。
為實現上述目標，本發明采用的技術方案為：
一種污水處理用液態菌劑的保存方法，包括以下過程：1)采用緩沖液調節液態 菌劑的pH至6-6.5;2)通氮氣排除液態菌劑中的溶解氧;3)投加脫氧劑和菌抑制劑; 4)以液體石蠟封面，并于室溫條件下密封保存;
所述的緩沖液為濃度為0.05-0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液或檸檬酸鹽緩沖液;
所述脫氧劑為抗壞血酸，所述菌抑制劑為山梨酸鉀，其中每千毫升液態菌劑中抗 壞血酸的投加量為0.5g-1g，山梨酸鉀投加量為2g-4g。
在本發明所述的保存方法，其中用氮氣排除液態菌劑中溶解氧優選采用曝氮氣的 方法實現，曝氣時間優選為10-30min。
在本發明所述的保存方法，其中所述液態菌劑液體石蠟用量以剛鋪滿液面為止。
在本發明所述的保存方法，其中所述的液態菌劑包括降油菌、苯酚降解菌、硝化 菌和COD降解菌。
本發明的主要思路是通過緩沖液調整使菌劑始終保存穩定的pH環境，且該pH 時本發明所述菌種抑制劑效果最好;通過曝氮氣方式除去液態菌劑中的溶解氧，更有 利于抑制菌劑生長，實現菌劑的長期保存;脫氧劑的添加和液體石蠟封面可以更好的 防止長期保存過程中空氣的進入，以達到長期有效的保存效果。
本發明與現有技術相比具有以下突出優點和有益效果：
1、相對低溫、冷凍干燥等傳統保存方法，本發明所述的液態菌劑保存方法具有 經濟高效、保存方法簡便、保存后菌種活性高等優勢。
2、本發明所述液態菌劑保存方法采用簡單的物理和化學作用實現對菌種活性的 抑制、且在室溫條件下即可實現對菌種的長期保存，大大減化了操作流程和保存成本。
3、本發明所述的液態菌劑保存方法以實現對污水處理領域多種功能菌(降油菌、 苯酚降解菌、硝化菌、COD降解菌等)的保存，且保存后菌活性高，對實際廢水仍 有較好的處理效果。
具體實施方式
實施例1：
市售的含油廢水降解菌(本實施例采用碧沃豐生物科技有限公司的OBT除油菌) 保存前后對含油廢水的降解情況。
通過發酵罐對含油廢水降解菌進行擴大培養，制備含油廢水降解菌液10L(菌 量:2.5×109cfu/ml，采用平板計數法，下同)，分二批用5L方形小口塑料桶進行保存。 使用本發明所述保存技術對含油廢水降解菌液保存步驟如下：用0.05mol/L磷酸鹽緩 沖液調整菌液pH值為6，向塑料桶內通入氮氣曝氣30min，按0.5‰和2‰(m/v)比 例分別加入抗壞血酸和山梨酸鉀，以液體石蠟封面后于室溫條件下密封保存。
通過上述方法保存后菌液在保存6個月和12個月時分別打開一批保存菌液計數， 并與新培養的含油廢水降解菌進行對比降油實驗，降油過程中控制菌量(107cfu/ml) 和初始含油濃度(60mg/L)一致，進行相同時間(72h)的降解實驗并對比降解效果。
結果表明：保存6個月后菌存活率為80%，72h含油廢水去油率為89.2%，此時 新培養菌液去油率為95.4%;保存12個月后菌存活率為68%，72h含油廢水去油率 為76.4%，此時新培養菌液去油率為92.9%。由此可見采用本發明所述保存技術對降 油菌保存6個月和12個月后菌液仍保持較高的存活率和降解活性。
實施例2
市售(本實施例采用碧沃豐生物科技有限公司的OBT裂解菌)苯酚降解菌保存 前后對苯酚降解活性的比較。
通過發酵罐對苯酚降解菌進行擴大培養，制備菌液10L(菌量:3.2×109cfu/ml)， 分二批用5L方形小口塑料桶進行保存。使用本發明所述保存技術對苯酚降解菌液保 存步驟如下：用0.07mol/L檸檬酸鹽緩沖液調整菌液pH為6.2，向塑料桶內通入氮氣 20min，按0.8‰和3‰比例分別加入抗壞血酸和山梨酸鉀，以液體石蠟封面并于室溫 條件下密封保存。
通過上述方法保存后菌液在保存6個月和12個月時分別打開一批保存菌液計數， 并與新培養的苯酚降解菌進行對比降解實驗，降解過程中控制菌量(107cfu/ml)和 廢水中初始苯酚濃度(以COD計為600mg/L)一致，進行相同時間(48h)的降解實 驗并對比降解效果。
結果表明：保存6個月后菌存活率為81.3%，48h苯酚去除率為90.8%，此時新 培養菌液去除率為96.4%;保存12個月后菌存活率為68.8%，48h苯酚去除率為 82.3%，此時新培養菌液去除率為95.7%。由此可見采用本發明所述保存技術對苯酚 降解菌保存6個月和12個月后菌液仍保持較高的存活率和降解活性。
實施例3：
市售硝化菌(本實施例采用碧沃豐生物科技有限公司的BZT硝化菌)保存前后 對氨氮降解情況。
將硝化菌配成10L菌液(菌量2.6×109cfu/ml)，分二批用5L方形小口塑料桶進 行保存。使用本發明所述保存技術對硝化菌保存步驟如下：用0.1mol/L檸檬酸鹽緩 沖液調整菌液pH為6.5，向塑料桶內通入氮氣10min，按1‰和4‰比例分別加入抗 壞血酸和山梨酸鉀，以液體石蠟封面并于室溫條件下密封保存。
通過上述方法保存后菌液在保存6個月和12個月時分別打開一批保存菌液計數， 并與新配制的硝化菌進行對比降解實驗，過程中控制菌量(107cfu/ml)和初始氨氮 濃度(60mg/L)一致，進行相同時間(48h)的降解實驗并對比降解效果。
結果表明：保存6個月后菌存活率為80.7%，48h氨氮去除率為86.8%，此時 新配制菌液去除率為94.4%;保存12個月后菌存活率為69.2%，48h氨氮去除率為 76.9%，此時新配制菌液去除率為93.1%。由此可見采用本發明所述保存技術對硝化 菌保存6個月和12個月后菌液仍保持較高的存活率和降解活性。
實施例4
市售COD降解菌(本實施例采用碧沃豐生物科技有限公司的COD去除菌)保 存前后對COD降解情況。
通過發酵罐對COD降解菌進行擴大培養，制備COD降解菌液10L(菌量4.7×109cfu/ml)，分二批用5L方形小口塑料桶進行保存。使用本發明所述保存技術對菌液保 存步驟如下：用0.08mol/L磷酸鹽緩沖液調整菌液pH為6.3，向塑料桶內通入氮氣15 min，按0.6‰和2‰比例分別加入抗壞血酸和山梨酸鉀，以液體石蠟封面并于室溫條 件下密封保存。
通過上述方法保存后菌液在保存6個月和12個月時分別打開一批保存菌液計數， 并與新培養的COD解菌進行對比COD降解實驗，過程中控制菌量(107cfu/ml)和初 始COD(1000mg/L)一致，進行相同時間(24h)的降解實驗并對比降解效果。
結果表明：保存6個月后菌存活率為78.7%，24h時COD去除率為90.1%，此 時新培養菌液COD去除率為96.4%;保存12個月后菌存活率為70.2%，24h時COD 去除率為84.5%，此時新培養菌液COD去除率為94.5%。由此可見采用本發明所述 保存技術對COD降解菌保存6個月和12個月后菌液仍保持較高的存活率和降解活 性。
